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Polysome-seq

多聚核糖体分析（Polysome Profiling）是研究翻译调控机制的重要技术。Polysome profiling通过蔗糖密度梯度超速离心，能够分离出free mRNA、40S和60S核糖体亚基、单核糖体以及多聚核糖体。这一技术不仅可用于特定mRNA的靶向分析，还可用于整体分析，为深入理解翻译水平的调控机制提供了有力工具。

技术方法创新研究建立了适用于成熟果实的多组学联合分析技术体系，包括：m6A修饰全转录组图谱检测（m6A-seq）：定位m6A修饰在转录组中的分布。甲醛交联-免疫共沉淀（FA-CLIP）：鉴定SlYTH2直接结合的mRNA靶点。多聚核糖体图谱分析（polysome profiling）：解析mRNA翻译效率变化。

通过qPCR发现，EBP1 mRNA的表达量在转录水平上并未受到RALF1的显著影响，而是通过某种机制和转录后调控相关。进一步利用Polysome profiling分析发现，RALF1对EBP1 mRNA翻译的促进作用取决于FER。用环己酰亚胺（CHX，一种mRNA翻译阻碍因子）阻碍蛋白的合成后，EBP1不再积累。